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抗體制備對(duì)血清的采集與保存說明

更新時(shí)間:2020-08-18點(diǎn)擊次數(shù):1168
   抗體是機(jī)體在抗原刺激下所產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答的重要產(chǎn)物,也是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中的常用試劑,對(duì)于抗原的分析鑒定和定量檢測(cè)極為重要,在各種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷中廣泛應(yīng)用。抗體制備技術(shù)發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段:用純化抗原免疫動(dòng)物獲得血清的多克隆抗體為一代抗體;用B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體為第二代抗體;利用基因工程技術(shù)制備的基因工程抗體為第三代抗體。有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強(qiáng)和效價(jià)高)的抗體。
  我們以家兔為例,家兔是常用以產(chǎn)生抗體的動(dòng)物,因此主要討論兔血的收集。羊等較大動(dòng)物以頸靜脈、動(dòng)脈取血,鼠等小動(dòng)物取血可參閱有關(guān)資料。取兔血有兩種方法:一是耳緣靜脈或耳動(dòng)脈放血,一是頸動(dòng)脈進(jìn)血,也可心臟采血。取動(dòng)脈或靜脈放血時(shí),將兔放進(jìn)一個(gè)特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。剪往耳緣的毛,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管擴(kuò)張、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,快速切開動(dòng)脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30-40ml。然后用棉球壓迫止血,凝血后洗往二甲苯。二星期后,可在另一耳放血。此法可反復(fù)多次放血。頸動(dòng)脈放血時(shí),將兔仰臥,固定于兔臺(tái),剪往頸部的毛,切開皮膚,暴露頸動(dòng)脈,插管放血。放血過程中要嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。
  收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,置4℃下,過夜(切勿冰凍)析出血清,離心4000rpm,10min。在無菌條件,吸出血清,分裝(0.05-0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后貯存于4℃冰箱保存。
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