久久久久精品,国产精品久久久久久久久久直播 ,国语对白做受XXXXX在线中国,亚洲精品无码专区

010-56256916

技術文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁技術文章如何對包涵體蛋白進行表達與復性

如何對包涵體蛋白進行表達與復性

更新時間:2022-01-18點擊次數(shù):1751

關于包涵體的復性一直是生物制藥的瓶頸,包涵體的處理一般包括這么幾步:菌體的破碎、包涵體的洗滌、溶解、復性以及純化。

一、包涵體蛋白的表達

在平板上挑取單菌落,接種于含有氨芐青霉素和卡那霉素抗性的5 ml LB培養(yǎng)基中,37 ℃過夜培養(yǎng),然后轉接到100 ml LB 培養(yǎng)基中,37 ℃培養(yǎng)至A600 為0.4~0.6時,加入IPTG 至終濃度為0.5mmol/L 誘導3.5 h。8000 r/min 離心5 min 收集菌體,加入10 ml 50 mmol/LTris-HCl,冰浴下超聲波破碎后12000 r/min離心30 min收集沉淀。

二、包涵體的洗滌
在包涵體中加入包涵體洗滌液:50 mmol/L Tris—HCl,1 mmol/L EDTA,50 mmol/L NaCl,w=0.5%TritonX-100,pH 8.0;37℃振蕩洗滌1~2 h,然后8 000 r/min 離心15 min,收集沉淀。

三、包涵體的溶解
洗滌后的包涵體加入適量的(包涵體溶解液):6 mol/L 尿素,50 mmol/L Tris—HCl,1 mmol/L  EDTA,50mmol/L NaCl,10 mmol/L β-ME,pH 8.0(注:β-ME用時現(xiàn)加),于磁力攪拌器上攪拌過夜,1000  r/min離心30 min,取上清即得包涵體溶解液。

四、包涵體的復性
包涵體的復性目前常用的主要有兩種方式:1,稀釋溶液,但是操作的液體量大,蛋白稀釋;2,透析,超濾或電滲透析去除變性劑。

1.包涵體的稀釋復性
設定不同的復性條件:蛋白質量濃度、尿素濃度、溫度、氧化還原條件、加入Ttiton X-100與環(huán)糊精的量、復性時間等,使變性溶解的包涵體稀釋復性,復性一定時間后取樣測酶活性。

2.包涵體的透析復性
包涵體蛋白的復性將8 mol/L 尿素溶解后的樣品裝入透析袋,密封置于復性液I(0.2 mol/L Tris-HCl;0.5 mol/L NaCl;5%甘油;5 μmol/L EDTA;pH8.5),4 ℃ 透析12 h 后再轉入復性液II(0.2 mol/L Tris-HCl;0.5 mol/L NaCl;)4 ℃ 透析12 h,12000 r/min 離心30 min,收集上清進行蛋白濃度及活性測定。


熱線電話:010-56256916

關注公眾號

Copyright © 2025 安諾倫(北京)生物科技有限公司 版權所有    備案號:京ICP備16059737號-3

技術支持:化工儀器網    管理登錄    sitemap.xml

亚洲AV无码久久寂寞少妇| 被黑人猛躁10次高潮视频| 九色丨PORNY丨自拍 ICU| 被老头疯狂灌浆怀孕小说| 天堂资源8在线| 一本久道中文无码字幕AV| china中国bingo视频| 公开高潮当众露出羞耻h| 国产超碰人人模人人爽人人添| 国产精品妇女一二三区| 丁香六月| 男人和女人高潮做爰视频| 黑人狂桶女人高潮嗷嗷叫小说| 亚洲AV无码一区二区三区不卡| 性欧美乱熟妇xxxx白浆| 中文字幕一区二区人妻| 久久99国产综合精品| 99在线精品免费视频九九视| 婷婷大伊香蕉五月天视频| 含一整夜 好涨h| 国产精品免费A V片在线观看 | 天码AV无码一区二区三区四区| 日韩精品无码一区aaa片| 熟透的岳跟岳弄了69视频| 性色欲网站人妻丰满中文久久不卡| 亚洲自偷自偷偷色无码中文| 亚洲中文字幕无码久久2021| 亚洲一区二区三区| 性熟妇videos另类hd| 体验区试看120秒啪啪免费| 亚洲精品卡一卡2卡3卡4卡| 亚洲AV无码成人精品区在线观看| 欧美 亚洲 另类 偷偷 自拍| 波多野结衣在线视频| 暴露放荡的娇妻| 亚洲国产精品成人综合色在线| 国产女人AAA级久久久级| 欧美老妇交乱视频在线观看| 亚洲AV色欲色欲WWW| 粗大的内捧猛烈进出在线视频| 欧洲aaaaa特级毛片|