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單克隆抗體制備的基本方法

更新時間:2022-06-23點擊次數(shù):1396
  抗體是機體在抗原刺激下產(chǎn)生的能與該抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。常規(guī)的抗體制備是通過動物免疫并采集抗血清的方法產(chǎn)生的,因而抗血清通常含有針對其他無關(guān)抗原的抗體和血清中其他蛋白質(zhì)成分。一般的抗原分子大多含有多個不同的抗原決定簇,所以常規(guī)抗體也是針對多個不同抗原決定簇抗體的混合物。即使是針對同一抗原決定簇的常規(guī)血清抗體,仍是由不同B細胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)的抗體組成。
 
  單克隆抗體制備的基本方法:
  對抗原的要求是純度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原,可取1×107個細胞作腹腔免疫??扇苄钥乖杓?福氏佐劑并經(jīng)充分乳化,如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原,可將抗原所在的電泳條帶切下,研磨后直接用以動物免疫。
  選擇與所用骨髓瘤細胞同源的BALB/c健康小鼠,鼠齡在8~12周,雌雄不限。為避免小鼠反應而不佳或免疫過程中死亡,可同時免疫3~4只小鼠。
  免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同,因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異,以獲得抗體為目的。免疫間隔一般2~3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高,融合后細胞產(chǎn)生特異抗體的可能性越大,而且單克隆抗體的質(zhì)量(如抗體的濃度和親和力)也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關(guān)。末次免疫后3~4天,分離脾細胞融合。
 
  在體外培養(yǎng)條件下,細胞的生長依賴適當?shù)募毎芏?,因而,在培養(yǎng)融合細胞或細胞克隆化培養(yǎng)時,還需加入其他飼養(yǎng)細胞(feedercell)。常用的飼養(yǎng)細胞為小鼠的腹腔細胞,制備方法為用冷凍果糖液注入小鼠腹腔,輕揉腹部數(shù)次,吸出后的液體中即含小鼠腹腔細胞,其中在巨噬細胞和其他細胞。亦有用小鼠的脾細胞、大鼠或豚鼠的腹腔細胞作為飼養(yǎng)細胞的。在制備飼養(yǎng)細胞時,切忌針頭刺破動物的消化器官,否則所獲細胞會有嚴重污染。飼養(yǎng)細胞調(diào)至1×105/ml,提前一天或當天置板孔中培養(yǎng)。
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