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單克隆抗體的純化——艾柏森生物

更新時(shí)間:2024-02-22點(diǎn)擊次數(shù):465

單克隆抗體的純化是一個(gè)關(guān)鍵步驟,確??贵w的高純度和活性。以下是一般性的單克隆抗體純化流程:

 

細(xì)胞培養(yǎng): 單克隆抗體通常是從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或其他表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn)的。首先,需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),以產(chǎn)生抗體。

 

 

收集培養(yǎng)上清液: 抗體通常以分泌的形式存在于培養(yǎng)上清液中。上清液是通過(guò)離心來(lái)去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞殘?jiān)缓笫占逡阂赃M(jìn)行后續(xù)處理。

 

 

蛋白A親和層析: 蛋白A是一種常用的親和層析介質(zhì),用于純化大多數(shù)IgG類型的抗體??贵w可以與蛋白A結(jié)合,而其他污染物則不會(huì)結(jié)合,因此可以通過(guò)洗脫步驟來(lái)純化抗體。

 

 

離子交換層析: 如果需要進(jìn)一步提高純度,可以使用離子交換層析來(lái)去除殘留的污染物和其他蛋白質(zhì)。通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度和pH值,可以選擇性地洗脫抗體。

 

 

尺寸排除層析: 這是一個(gè)常用的步驟,用于進(jìn)一步去除任何殘留的雜質(zhì),如聚集物或碎片。尺寸排除層析根據(jù)分子大小將溶液分離,較大的分子會(huì)被排除,而較小的單克隆抗體則通過(guò)。

 

 

濃縮和 buffer exchange 在純化的最后階段,抗體可以被濃縮,并且可以進(jìn)行緩沖液的交換,以適應(yīng)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)或應(yīng)用。

 

 

純化后的分析: 純化后的抗體需要進(jìn)行質(zhì)量分析,包括濃度測(cè)定、純度分析、功能測(cè)試等,以確保其適用于預(yù)期的應(yīng)用。

 

以上步驟是單克隆抗體純化的一般流程,具體操作可能會(huì)因?qū)嶒?yàn)?zāi)康?、抗體類型和純化系統(tǒng)的不同而有所變化。


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