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納米抗體制備方法之噬菌體篩選技術(shù)

更新時(shí)間:2021-10-25點(diǎn)擊次數(shù):1689
  納米抗體是在駱駝科及鯊魚(yú)科動(dòng)物血清中大量存在的一種天然抗體,與常規(guī)單克隆抗體相比,納米抗體缺失輕鏈,其重鏈可變區(qū)VHH的CDR3區(qū)較長(zhǎng),是目前已知的可結(jié)合抗原的單位。特殊的結(jié)構(gòu)特征和性質(zhì)賦予了其一些其它常規(guī)抗體或抗體片段所不具有的特性。納米抗體(nanobodies,Nbs)因具有較小的相對(duì)分子質(zhì)量,其*的分子結(jié)構(gòu)使其適用于疾病診斷治療等諸多領(lǐng)域,當(dāng)前得到了廣泛的關(guān)注。
  納米抗體制備方法之噬菌體篩選技術(shù):
  噬菌體展示技術(shù)是一種由Simth于1985年建立的用于識(shí)別蛋白質(zhì)和它相互作用蛋白的體外篩選技術(shù)。噬菌體展示的具體原理是將外源蛋白質(zhì)的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白的一個(gè)基因上,使外源基因隨著外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá),蛋白以與外殼蛋白融合的形式展示在噬菌體表面。被展示的蛋白或者多肽可以保持相對(duì)的空間結(jié)構(gòu)和生物活性,因而可以利用靶蛋白對(duì)其進(jìn)行篩選。
  篩選的方法主要分為固相篩選和液相篩選兩種。通過(guò)生物淘洗法、競(jìng)爭(zhēng)法、消減法、選擇性感染篩選、延遲性感染篩選等方法可以對(duì)和靶蛋白強(qiáng)力結(jié)合的基因片段篩選出來(lái)。具體地,篩選過(guò)程以靶蛋白為固定相,以噬菌體展示文庫(kù)為流動(dòng)相,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的共同孵育后,洗去未結(jié)合的游離噬菌體,然后以競(jìng)爭(zhēng)受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體,洗脫的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng)繁殖擴(kuò)增,進(jìn)行下一輪洗脫,經(jīng)過(guò)3輪~5輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后,即可得到與靶蛋白具有高親和性的抗體。經(jīng)過(guò)篩選后,對(duì)篩選得到的蛋白進(jìn)一步用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定或免疫印跡法對(duì)其進(jìn)行特異性篩選,獲取目的克隆或鋪盤進(jìn)行單克隆分離繼而進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
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