使用步驟

1、取 5-10 mL 過(guò)夜培養(yǎng)菌液加入離心管中，12000 rpm 離心 2 min 收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 250 uL Buffer PI (已加入 RNase A)，使用移液槍或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀，確保無(wú)菌塊。37C靜置 15 min，以除去 RNA。

3、向離心管中加入 250 L Buffer P2，溫和上下顛倒混勻 4-6 次，充分混勻使菌體裂解，此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠。

注意:溫和地混勻，不要?jiǎng)×艺鹗?，以免打斷基因組 DNA。所用時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。

4、向離心管中加入 350 L Buffer P3，立即溫和上下顛倒混勻 8-10 次，充分混勻，此時(shí)應(yīng)出現(xiàn)白色絮狀沉淀，12000 rpm 離心 10 min。注意:P3 加入后立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果離心完仍有沉淀漂浮，可延長(zhǎng)離心時(shí)間取上清。

5、將步驟 4 中的上清液轉(zhuǎn)移到新的 2 mL 滅菌離心管中，加入等體積異丙醇，混勻，加入50 uL 輕基磁珠，顛倒混勻 1 min，室溫放置 2 min。

6、將步驟 5 中的離心管放在磁力架上靜置，磁珠吸附后，小心吸去液體。

7、將離心管從將離心管從磁力架上取下，加入 600 L Buffer Pw (請(qǐng)確認(rèn)是否加入無(wú)水Z醇)，混勻 2 min。

注意:加入漂洗液 PW 后，室溫靜置 2 min，有助于更好的去除雜質(zhì)。

8、將離心管放置于磁力架上靜置，磁珠吸附后，小心吸去液體。

9、將離心管從磁力架上取下，加入 600 uL Bufer PW，混勻2 min。

10、將離心管放置于磁力架上靜置，磁珠吸附后，棄廢液，吸盡管底管蓋的液體。

11、將離心管置于磁力架上，室溫晾干 15 min。注意:乙醇?xì)埩魰?huì)抑制后續(xù)的酶反應(yīng)，所以晾于時(shí)要確保乙醇揮發(fā)干凈。但也不要干燥太長(zhǎng)時(shí)間，以免難以洗脫質(zhì)粒 DNA。

12、將離心管從磁力架上取下，加入 100-200 L 洗脫緩沖液 TB 或 ddHO (洗脫液可在水浴鍋中預(yù)熱)，振蕩混勻，置于 56C水浴鍋中，孵育 10 min，期間每隔2 min 顛倒混勻。

13、將離心管放置于磁力架上，磁珠吸附后，小心將質(zhì)粒 DNA 溶液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新離心管中，并于-20C保存。